一些細(xì)胞和組織可在懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)，但相當(dāng)一部分哺乳動(dòng)物細(xì)胞需要表面貼壁。
用于提供細(xì)胞體外培養(yǎng)環(huán)境的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿除了具有良好的透明度和無(wú)毒、無(wú)菌外，還需經(jīng)表面改性處理使之能夠貼壁、分裂和生長(zhǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶特征
厚度均勻，底部無(wú)畸變；
密封蓋/濾膜蓋（0.22μm疏水膜）；
設(shè)計(jì)的瓶蓋可快速旋轉(zhuǎn)；
側(cè)面可疊放，更有效地利用培養(yǎng)箱；
無(wú)毒，無(wú)DNA/RAN酶；
伽馬射線(xiàn)消毒滅菌。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶的分類(lèi)：
培養(yǎng)瓶的瓶頸也有多種樣式，有直頸、斜頸、角度頸、三角形、矩形。
直頸：可以減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋里；
斜頸：易于傾注，移液管或者細(xì)胞刮容易進(jìn)入瓶體；
角度頸：移液管或者細(xì)胞刮易于進(jìn)入瓶身，并且可減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋；
三角形：移液管或細(xì)胞刮更易達(dá)到瓶角，寬底增加穩(wěn)定性；
矩形：斜頸的矩形培養(yǎng)瓶瓶底至瓶頸是一個(gè)坡度設(shè)計(jì)，易于傾注，移液管或者細(xì)胞刮容易進(jìn)入瓶體，大部分斜頸瓶都有一個(gè)裙邊以增加穩(wěn)定性。
直頸和角度頸的矩形培養(yǎng)瓶整個(gè)瓶底都是培養(yǎng)面，節(jié)省空間并減少培養(yǎng)基因晃動(dòng)而流到瓶蓋。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別
培養(yǎng)瓶適合長(zhǎng)期培養(yǎng)、傳代、作為種子細(xì)胞。
不易污染。
培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板適合在各種實(shí)驗(yàn)中選用，臨時(shí)培養(yǎng)。
培養(yǎng)面積T25約為25，T75為75。
6孔板、10/孔。
12孔板4/孔。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別在于，安全系數(shù)的高低、培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量的多少。
個(gè)人感覺(jué)培養(yǎng)瓶的安全系數(shù)更高，操作也比較方便。
培養(yǎng)瓶瓶可以用來(lái)做相對(duì)大規(guī)模的培養(yǎng)或比較容易被污染的細(xì)胞。
而培養(yǎng)皿比較適合小規(guī)模的培養(yǎng)或做一些對(duì)照分析實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法。
也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。
懸浮性細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
具體操作步驟如下：
將長(zhǎng)滿(mǎn)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。
加入0.5—1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀(guān)察細(xì)胞。
隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。
觀(guān)察消化也可以用肉眼，當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。
一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。
用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。
第二天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況。
以上是細(xì)胞培養(yǎng)瓶在細(xì)胞傳代中的應(yīng)用，消化液的配制方法如下：稱(chēng)取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無(wú)Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過(guò)濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。
胰酶溶液中也可加入EDTA，使終濃度達(dá)0.02％。
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