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常用的轉基因斑馬魚品系

通過特異性基因啟動子控制下游的熒光蛋白在特定的器官或細胞中表達而建立的斑馬魚轉基因系，可實現對某一特定器官或細胞的示蹤。目前已開發(fā)和利用的一系列標記中性粒細胞和巨噬細胞的轉基因斑馬魚品系，實現了炎癥情況下細胞反應的可視化，使得在體內三維環(huán)境中追蹤中性粒細胞和巨噬細胞的遷移成為可能，為觀察炎癥反應提供了獨特視角。

Mathias等［21］、Renshaw等［22］開發(fā)了新型的中性粒細胞特異性表達eGFP熒光的轉基因斑馬魚Tg（MPO：eGFP），其中性粒細胞在特異性髓過氧化物酶（MPO或mpx）啟動子的調控下表達eGFP。Mathias等［21］利用Tg（MPO：eGFP）斑馬魚觀察了組織損傷誘導的炎癥反應，其特征是損傷發(fā)生時中性粒細胞迅速向傷口部位趨化，損傷后期中性粒細胞向血管系統(tǒng)定向逆行趨化。Renshaw等［22］利用Tg（MPO：eGFP）斑馬魚首次提出證據表明抑制中性粒細胞凋亡與延遲炎癥消退有關。Hall等［23］建立了新的轉基因斑馬魚報告基因系Tg（lysC：：EGFP）和Tg（lysC：：DsRED2），利用溶菌酶C（lysC或lyz）啟動子驅動熒光蛋白表達，并且報告基因的表達模式與內源性LysC表達模式一致，實驗數據表明熒光蛋白標記巨噬細胞群體，但后來發(fā)現斑馬魚Lyz與Mpx共定位，該品系應作為中性粒細胞標記品系使用。Li等［24］構建了可以標記巨噬細胞和中性粒細胞的斑馬魚轉基因品系Tg（coro1a：eGFP），該品系是eGFP在coro1a調控序列的驅動下表達。Coronin 1a是一種肌動蛋白結合蛋白，其RNA是在白細胞中被特異性合成的。Li等［24］利用Tg（coro1a：eGFP；lyz：Dsred）斑馬魚記錄了組織再生過程中巨噬細胞和中性粒細胞的不同行為和功能，Tg（coro1a：eGFP；lyz：Dsred）可以觀察并區(qū)分巨噬細胞和中性粒細胞，綠色熒光標記巨噬細胞，黃色熒光標記中性粒細胞。

目前，中藥已在抗炎領域占有重要地位。在新型冠狀病毒肺炎疫情防治過程中，連花清瘟制劑［63］、清肺排毒湯［64］等中醫(yī)藥制劑因發(fā)揮良好的抗炎、預防作用，成為抑制患者病情惡化及增強易感者機體免疫功能的重要治療方法，且在新型冠狀病毒肺炎患者恢復及出院后的康復期中起主導作用，中藥在抗炎領域具有巨大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

斑馬魚作為一種新型模式生物，具有體積小、繁殖能力強、發(fā)育快、易于觀察、免疫系統(tǒng)高度保守等優(yōu)勢，隨著技術和方法的不斷改進，近年來斑馬魚在中藥抗炎領域的應用也逐漸深入。斑馬魚作為一個完整生命機體，能夠客觀、全面、系統(tǒng)地對中藥及其有效成分的抗炎活性進行評價，實現快速、有效的高通量篩選，也為抗炎中藥作用機制的研究提供了良好模型。斑馬魚模型的充分利用將為抗炎中藥的研究提供新思路和新方法，促進中藥抗炎領域的發(fā)展，斑馬魚模型在中藥抗炎領域也將擁有更廣闊的應用前景。